Mesure des acides sialiques Salivaires

Ce travail a pour but la recherche des facteurs méthodologiques relatifs à la mesure des concentrations salivaires en acides sialiques (AS).

Un volume de 42 ml de salive mixte a été recueilli à jeun chez 20 sujets témoins (6 hommes, 14 femmes) âgés de 32 à 45 ans (36 ± 5). Chaque prélèvement a été divisé en 3 fractions, deux d'entre elles sont soumises à une centrifugation (4000 ou 10000 tours/ min), puis leurs surnageant recueillis. Chaque fraction a été répartie en aliquotes de 500µl, conservées pour moitié à +4°C ou -20°C Pour un même sujet, les échantillons ont été analysés à différents temps : 0, 3, 5, 10, 20 et 40 jours. La détermination des AS salivaires a été effectuée selon la méthode d'AMINOFF à l'acide thiobarbiturique directement (acides sialiques libres) et après hydrolyse soit enzymatique (Neuraminidase 0,1 U /ml en tampon acétate 0,05 M pH 5,00 pendant 60 min) soit chimique (H2SO4 N à 80°C, pendant 60 min) (acides sialiques totaux).

La concentration salivaire en acides sialiques libres ou totaux est comparable, que l'échantillon soit ou non centrifugé. La conservation de la salive à - 20°C durant la période étudiée (0 à 40 jours) ne modifie pas la valeur des AS libres ou totaux, quelles que soient les concentrations initiales. Par contre (Figure), la conservation à +4°C s'accompagne d'une hydrolyse naturelle des AS, significative dès le 5éme jour (acides sialiques libres multipliés par 2 à 3) et d'autant plus rapide que les concentrations initiales en acides sialiques sont élevées. Au 20éme jour, la valeur des acides sialiques libres atteint celle des acides sialiques totaux, initialement comprise entre 60 et 125 µg/ ml. Comparativement à l'hydrolyse chimique, l'hydrolyse enzymatique a conduit à une évolution similaire mais avec des valeurs plus faibles.

Cette étude méthodologique nous a conduit à l'adoption du protocole suivant pour le dosage des acides sialiques salivaires : Mesures sur la salive totale, non centrifugée, fraîchement recueillie ou conservée à - 20°C, avant et après hydrolyse acide.